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蛋白质相互作用技术服务
 
细胞生物学服务 >> 蛋白相互作用检测 >> 蛋白质相互作用技术服务
蛋白质相互作用技术服务 

蛋白质相互作用技术服务
 
服务项目
技术简介
CO-IP
体内验证/寻找互作蛋白的技术,符合生理条件,准确性高
Pull-down
体外验证/寻找互作蛋白的技术,适用范围广
SILAC-IP
用于寻找互作蛋白,在COIP基础上引入SILAC标记,采用定量的方法区分假阳性蛋白,极大的降低了假阳性率
TAP
用于寻找互作蛋白,COIP基础上加入二次纯化,液质联用鉴定免疫复合物,灵敏度高,假阳性率更低
 
免疫共沉淀(CO-IP)和Pull-down简介
    免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原间的专一性作用为基础的、研究蛋白质相互作用的经典方法。 基本原理:用温和的裂解方式裂解细胞,目的是保留住细胞内的蛋白结合情况,向裂解液中加入“诱饵蛋白”特异性的抗体,抗体、诱饵蛋白和结合蛋白通过免疫反应形成复合物,洗脱收集复合物,SDS-PAGE电泳,western blot或质谱可验证或鉴定与诱饵蛋白互作的蛋白质。
    Pull-down又叫做蛋白质体外结合实验,是在外源条件下检测蛋白质间相互作用的方法。基本原理:将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,充当 “诱饵蛋白”,目的蛋白溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的结合蛋白,洗脱结合物后通过SDS-PAGE电泳分析,验证两种蛋白间的相互作用或筛选相应的目的蛋白;“诱饵蛋白”一般采用原核表达(也可以通过其他方式)获得,而“捕获蛋白”可以是细胞裂解物、纯化蛋白或表达系统获得的蛋白。
 
技术优势:
1.Co-IP基于细胞内的蛋白质相互作用,得到的诱饵蛋白是与靶蛋白天然结合的,符合体内真实生理状况。
2.Pull-down基于细胞外的蛋白相互作用,其应用范围更广。
    由于实验条件的限制,CO-IP的适用范围也受到一定影响,例如植物中可用于CO-IP实验的抗体极少,或某些动物组织由于含较多脂肪,都比较难进行Co-IP实验;比较而言,Pull-down实验大多采用标签(如GST)抗体来检测,因此适用范围更广;但Pull-down实验的前提是必须获得可溶的蛋白(而原核表达容易形成包涵体,这点需要考虑)。因此在实际应用中,可综合考虑实验条件,选择更合适的方法;而一般验证蛋白互作也常常需要将体内实验和体外实验结合起来。
 
    辉骏生物已成功完成数十例Co-IP或Pull-down技术服务,协助客户完成的CO-IP结果发布在Nature子刊上。我们承诺,若验证结果为阴性,我公司做第二遍验证,若两次结果均为阴性,仅收取80%的服务费用,最大程度的降低了客户的实验成本。
 
SILAC-IP技术简介
    在CO-IP基础上引入SILAC同位素标记来筛选互作蛋白的方法。基本原理:用轻、重链同位素培养基分别培养对照组和实验组细胞,传6代以后,细胞蛋白质被同位素完全标记上;在此基础上收集等量细胞,进行Co-IP实验,分离免疫复合物;之后,利用LC-MS/MS来定性和定量复合物中的蛋白:当实验组与对照组中某个蛋白质的含量达到统计学差异时,判定这个蛋白与诱饵蛋白具有相互作用。
 
技术优势:
1.特异性强,结果可信,假阳性极低;
2.高通量,能一次性检测到多种互作蛋白
3.能直接检测出与bait蛋白互作的其它蛋白的相对含量
 
    辉骏生物在细胞培养、CO-IP、蛋白质组学实验方面都有丰富的经验,拥有从SILAC细胞培养,到LC-MS检测和生物信息学分析的一整套服务体系,可以为客户提供全面的蛋白质互作服务;2013年已协助客户发表以SILAC-IP为主体的SCI论文。近两年,我们在 “SDS-PAGE+胶内酶解”的基础上开发了“磁珠偶联+溶液酶解”的方法,进一步提高了检测的灵敏度。
 
TAP-MS技术简介
    TAP是在COIP的基础上加入第二次亲和纯化,筛选互作蛋白的方法。基本原理:靶蛋白融合2个标签蛋白(STREP和Flag),采用慢病毒的方法介导靶蛋白在细胞内的过表达(同时设置对照组),用温和条件裂解细胞,分别获得实验组和对照组的细胞裂解液,2组样本分别经过两步连续的亲和纯化获得蛋白质复合物,再通过LC-MS分别鉴定实验组和对照组中的蛋白质。
 
技术优势:
1.采用双标签两步纯化获得高特异性的结合蛋白,可信度高
2.高通量,可以一次性鉴定到多种互作蛋白
 
服务优势:
辉骏生物拥有完善的细胞培养、载体构建、慢病毒包装、稳转细胞株建立、蛋白质互作、蛋白质质谱鉴定实验平台,可以为客户提供整体实验服务;已完成项目显示,该技术可以一次性检测到50-100种差异蛋白(即互作蛋白),能为客户的后期项目提供十分有利的研究基础。
 
实验服务周期及收费标准:咨询本公司
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点击:4916  录入时间:2015-4-29 
 
 
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