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RACE
 
分子生物学服务 >> RACE
RACE 

RACE(3'端和5'端-RACE)技术服务
 
      RACE(rapid-amplification ofcDNA ends,RACE) 即cDNA末端快速扩增技术,是基于PCR技术基础上由已知的一段cDNA片段,通过往两端延伸扩增从而获得完整cDNA的5'和3’末端的有效方法, 具有简单、快速、廉价等优势,在cDNA文库的构建及筛选,新基因的发现等方面得到了广泛的应用。
 
原理及技术服务流程
(1)3'-RACE的技术服务流程
利用连有SMART寡核营酸序列通用接头引物的Oligo(dT)30MN作为引物反转录mRNA,形成cDNA链,然后以cDNA为模板,基因特异引物GSP1(gene specific primer,GSP)作为上游引物,含有部分接头序列的通用引物UPM(universal primer,UPM)作为下游引物,PCR扩增目的基因的3' 末端。

3'-RACE的技术服务流程

                    图1:3'-RACE的技术服务流程
 
(2) 5'-RACE的技术服务流程
利用连有SMART寡核营酸序列通用接头引物的Oligo(dT)30MN作为引物和反转录酶MMLV反转录mRNA,形成cDNA。反转录时,利用该反转录酶具有的末端转移酶活性,在cDNA的5'末端自动加上3-5个(dC)残基,退火时(dC)残基与含有寡核苷酸序列Oliogo(dG)的通用接头引物配对,进而转换为以SMART序列为模板继续延伸而连上通用接头.最后以含有部分接头序列的通用引物UPM(universal primer,UPM)作为上游引物,目的基因特异引物2(GSP 2 genespecific primer,GSP)作为下游引物, SMART第一链cDNA为模板,PCR扩增目的基因的5'末端。

5'-RACE的技术服务流程

                    图2:5'-RACE的技术服务流程
 
最终,拼接3'和 5'-RACE产物而获得目的基因全长的cDNA,或者可以通过分析3'和 5'-RACE产物后,设计引物扩增出全长的cDNA。
 
服务内容
RNA提取和定量;反转录;RACE(3'和 5'-RACE);结果分析;实验报告提交。
 
客户提供
1.组织或细胞等材料,不接受RNA样本,除非有足够证据证明您的RNA是高质量的;
2.尽可能多的背景资料,如已知序列、丰度、估计长度、种属同源情况等。
 
实验报告内容
1.扩增片段的电泳图,含3'和 5'-RACE PCR片段的质粒载体及细菌一份
2.全长cDNA序列及测序报告
3.RACE完整的实验步骤、使用仪器、引物序列等。
 
实验周期及收费标准:咨询本公司
 
 
 

点击:10749  录入时间:2014-12-22 
 
 
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